PRÁCTICA 32: TEST DE DROGAS.

• OBJETIVOS:

Determinación cualitativa de varias drogas y sus metabolitos en orina humana.

• FUNDAMENTOS:

Son inmunoensayos competitivos.

• MATERIALES:

- Test Drug-Screen.
- Muestra de orina.

• PROCEDIMIENTO:

- Extraer el test del envoltorio.
- Sumergir la tira en la orina durante aproximadamente 15-30''. La zona de plástico no debe entrar en contacto con la orina.
- Esperar aproximadamente 5' antes de leer los resultados. No interpretar los resultados pasados 10'.

• RESULTADOS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

La zona de test (T) detectan las drogas que pueden encontrarse en la muestra de orina. La otra es la zona de control (C).
- Resultado - -> aparece una línea rosa en la zona de T y en la zona C.
- Resultado + -> aparece una línea rosa en la zona C.
Si en la zona de control no puede distinguirse claramente la línea rosa, el test es inválido.

• RESULTADOS:

AMP (Anfetaminas) -> -
BDZ (Oxazepam) -> +
CDC (Benzoylecgonina) -> +
MOR/OPIO (Methanfetamina) -> +
THC (Cannabis) -> +

• FOTOGRAFÍAS:

PRACTICA 31: CREATINA QUINASA.

• OBJETIVOS:

Determinación cuantitativa de creatina quinasa (CK).

• UTILIDAD CLÍNICA:

Determinación de niveles elevados en suero en pacientes con alteraciones del músculo esquelético y en infartos de miocardio.

• FUNDAMENTOS:

La CK cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato de la fosfocreatina al ADP. Ésta reacción se acopla con otras catalizadas por la HK y por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa.

• MATERIALES:

- Gradillas.
- Micropipeta 1000 Y 100μL.
- Puntas de pipeta.
- Cubeta de espectofotómetro.

• REACTIVOS:

- R1
- R2

• PROCEDIMEINTO:

Piepetar en una cubeta:
1000 μL de RT Y 20 μL de muestra.
Mezclar e incubar 2' calculamos las distintas absorbancias(4 MEDIDAS) trascurrido 3'.

• RESULTADOS:

  DATOS ESPECTOFOTÓMETRO DATA-TEST ATOM:

- 0,365 nm
- 0,349 nm.
- 0,337 nm.
- 0,348 nm.

VELOCIDAD REACCIÓN ENZIMÁTICA = 105,2 UI/L
CÁLCULO = 105,2 X 8095 = 851, 594 UI/L.

• FOTOGRAFÍAS:
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  

 

PRÁCTICA 30: FOSFATASA ÁCIDA.

• OBJETIVOS:

Determinación cuantitativa de fosfatasa ácida (FAC).

• UTILIDAD CLÍNICA:

Determinación de niveles elevados de fosfatasa ácidas se encuentran en alteraciones hematológicas, óseas, hepáticas, alteraciones prostáticas como hipertrófia, prostatitis o carcinoma.

• FUNDAMENTOS:

Método Hillman: La fosfatasa ácida a pH 5.0 hidroliza el  α-naftilfosfato o fosfato inorgánico a α-naftol. El α-naftol se hace reaccionar con un cromógeno diazotado formando un compuesto coloreado con pico de absorción a 405 nm.

• MATERIALES:

- Gradillas.
- Micropipeta 1000 Y 100μL.
- Puntas de pipeta.
- Cubeta de espectofotómetro.

• REACTIVOS:

- RT
- R3
- R4 -> ácido acético.

• PROCEDIMIENTO:

 Añadimos 1000 μL de RT en dos tubos
- FAC Total (T) -> 1000 μL RT, 100 μL de muestra y 5 μL de acético.
- FAC No Prostática (No P) -> 1000 μL RT, 10 μL R3, 100 μL muestra y 5 μL acético
  Mezclamos e incubamos 5' calculamos las distintas absorbancias(4 MEDIDAS) trascurrido 3'.

• RESULTADOS:

- DATOS ESPECTOFOTÓMETRO DATA-TEST ATOM:

FAC TOTAL:
-  0,280 nm.
-  0,296 nm.
-  0,319 nm.
- 0,338 nm.
[] = 14,55
FAC NO PROSTÁTICA:
- 0,205 nm.
- 0,208 nm.
- 0,230 nm.
- 0,215 nm.
[] = 1,750






VELOCIDAD REACCIÓN ->  14,55- 1,750 = 12,8 U/L de FAC prostática.

• FOTOGRAFÍAS:

PRÁCTICA 29: SEMINOGRAMA.

• OBJETIVO:

Valorar la capacidad reproductora de un varón. También cuando se realice un estudio postvasectomía, con la intención de comprobar si los espermatozoides han desaparecido totalmente del eyaculado.

• APARATAJE:

- Baño termostatizado.
- Estufa.

• MATERIALES:

- Portaobjetos y cubreobjetos.
- Pipeta Pasteur.
- Cámara de Neubauer.
- Microscópio.

• REACTIVOS:

- Eosina azulada 1% con agua destilada.
- Nigrosina 2% con agua destilada.
- Solución de Macomber-Saunders ( 5g bicarbonato sódico, 1ml formol al 40% y agua dstilada hasta 100 mL).
- Panóptico rápido.
- Metanol.

• MUESTRA:

Semen.

• PROCEDIMIENTO:

EXÁMEN MICROSCÓPICO :

- VITALIDAD:
Mezclar 50µl de semen con 50µl de eosina axulada , esperar 20/30'' y añadir 100µl de nigrosina.
Agitar y realizar una extensión sobre portaobjetos.
Tras el secado de la preparación, observar al microscopio con objetivo de inmersión.

- RECUENTO:
Diluimos el semen al 1/10 en la solución de Macombe-Sanders
Montamos y cargamos la cámara de Neubauer y contamos los 16 cuadraditos de las esquinas (zona para leucocitos).

- MORFOLOGÍA:
 Realizamos una extensión sobre portaobjetos con una gota de semen y dejaos que seque perfectamente en estufa. 
 Fijar con metanol(5', renovando cada 1'5 minutos).
Teñir con panóptico rápido.
Visualizar al microscopio con el objetivo de inmersión:

• FOTOGRAFÍAS Y RESULTADOS:

-VITALIDAD:

Todos los espermatozoides están teñidos de rojo (muertos).

- RECUENTO:

Espermatozoides contados -> 82
82x10x10000 = 8200000 espermatozoides/ml

- MORFOLOGÍA:

Espermatozoides normales -> 8
Espermatozoides anormales ->  17

PRÁCTICA 28: INMUNODOTING PARA HEPATITIS AUTOINMUNES

• OBETIVOS:

Detección en suero humano de auto-Ac tipo Ig G-Ig M antimicondriales M2 dirigidos contra los siguientes Ag: M2/PDC nativo y M2 recombinante.

• FUNDAMENTOS:

La prueba se basa en el principio de Enzimoinmunoanális.

• APARATAJE:

- Agitador automático.

• MATERIALES Y REACTIVOS:

- Tira dot.
- Bandeja de incubación.
- Tampón de dilución: tapón amarillo.
- Conjugado: tapón azul.
- Sustrato: bote marrón.
- Pipetas automáticas.
- Vaso de precipitado.
- Muestra (suero).

• PROCEDIMIENTO:

- Colocar la tira dot en el canal de la bandeja de incubación con los puntos azules mirando hacia arriba.
- Añadir 2000 μL de tampón de lavado en dicho canal. Incubar 10' en agitación (hasta hacer desaparecer los puntos azules de la tira).
- Invertir la bandeja y eliminar el líquido (las tiras quedarán adheridas)
- Añadir 1500μL de tampón de dilución .
- Añadir 1000μL de muestra del paciente. Incubar 15' en agitación.
- Eliminar el líquido invirtiendo la bandeja. Lavar tres veces con 1500μL de tampón de lavado.
- Añadir 1500μL de conjugado. Incubar 15' en agitación.
- Eliminar el líquido invirtiendo la bandeja. Lavar tres veces con 1500μL de tampón de lavado.
- Añadir 1500μL de sustrat. Incubar 10' en agitación.
- Eliminar el líquido invirtiendo la bandeja. Lavar una vez más con 1500μL de tampón de lavado para obtener la reacción.
- Extraer la tira del canal y dejar secar en papel absorbente para visualizar resultados.

• RESULTADOS:

- Control positivo -> + . Debe aparecer coloreado en todos los pacientes, esto indicará que la prueba se ha desarrollado correctamente.
- Control negativo -> - . Indica que la muestra está libre de sustancias que interfieran.
- El resto de puntos correspondientes a antígenos específicos  aparecen como -.

• FOTOGRAFÍAS: