PRÁCTICA 30: FOSFATASA ÁCIDA.

• OBJETIVOS:

Determinación cuantitativa de fosfatasa ácida (FAC).

• UTILIDAD CLÍNICA:

Determinación de niveles elevados de fosfatasa ácidas se encuentran en alteraciones hematológicas, óseas, hepáticas, alteraciones prostáticas como hipertrófia, prostatitis o carcinoma.

• FUNDAMENTOS:

Método Hillman: La fosfatasa ácida a pH 5.0 hidroliza el  α-naftilfosfato o fosfato inorgánico a α-naftol. El α-naftol se hace reaccionar con un cromógeno diazotado formando un compuesto coloreado con pico de absorción a 405 nm.

• MATERIALES:

- Gradillas.
- Micropipeta 1000 Y 100μL.
- Puntas de pipeta.
- Cubeta de espectofotómetro.

• REACTIVOS:

- RT
- R3
- R4 -> ácido acético.

• PROCEDIMIENTO:

 Añadimos 1000 μL de RT en dos tubos
- FAC Total (T) -> 1000 μL RT, 100 μL de muestra y 5 μL de acético.
- FAC No Prostática (No P) -> 1000 μL RT, 10 μL R3, 100 μL muestra y 5 μL acético
  Mezclamos e incubamos 5' calculamos las distintas absorbancias(4 MEDIDAS) trascurrido 3'.

• RESULTADOS:

- DATOS ESPECTOFOTÓMETRO DATA-TEST ATOM:

FAC TOTAL:
-  0,280 nm.
-  0,296 nm.
-  0,319 nm.
- 0,338 nm.
[] = 14,55
FAC NO PROSTÁTICA:
- 0,205 nm.
- 0,208 nm.
- 0,230 nm.
- 0,215 nm.
[] = 1,750






VELOCIDAD REACCIÓN ->  14,55- 1,750 = 12,8 U/L de FAC prostática.

• FOTOGRAFÍAS: