PRÁCTICA 25: BILIRRUBINA DIRECTA

• OBJETIVO:

Determinación de bilirrubina directa (conjugada) en suero.

• UTILIDAD CLÍNICA:

La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina. Es transportada del bazo al hígado y se excreta en bilis.
La hiperbilirrubinemia es el resultado de un crimento de la bilirrubina en plasma. Causas más probables de la hiperbilirrubinemia.
Bilirrubina Directa -> Colestasis hepática, alteraciones genéticas y alteraciones hepáticas.

• FUNDAMENTOS:

 La bilirrrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanilico diazotado midiéndose fotométricamente.  En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina también la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total.

• APARATAJE:

- Espectofotómetro.

• MATERIALES:

 - Pipetas de 1500μl, 100 μl y 50μl.
- Puntas de pipeta.
- Gradilla.
- Cubetas de espectofotómetro.
- Gradilla de espectofotómetro.

• REACTIVOS:

 -  R1
-  R2
- Muestra(suero).

•  PROCEDIMIENTO:

En primer lugar pipetearemos las siguientes cantidades:
- Blanco -> 1500μl, R1 y 100μl muestra.
- B. Directa -> 1500μl R1, 50μl R2 y 100μl muestra.
Mezclar e incubar 5' a 15/25ºC.
Leer absorbancias.

• RESULTADOS:

 ABSORBANCIAS:
- Blanco = 0 nm
- Bilirrubina Directa = 0,078 nm


 ((A) MUESTRA - (A) BLANCO MUESTRA) X 14 =  mg/dL bilirrubina en la muestra.

(0´078 - 0) x 14 = 1,092 mg/dL bilirrubinae en muestra.

• FOTOGRAFÍAS: