PRÁCTICA 17: ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEÍNAS PLASMÁTICAS.

• OBJETIVOS:

Separación de las distintas fracciones lipoprotéicas: quilomicrones, β - lipoproteínas/LDL, pre-β-lopoproteínas/VLDL, α-lipoproteínas/HDL y pre-α-lipoproteínas.

• FUNDAMENTOS:

Las lipoproteínas son grandes moléculas localizadas en el plasma. Están constituidas por proteínas asociadas a fosfolípidos, triglicéridos o colesterol mediante enlaces iónicos o fuerzas de Van der Waals.
Se clasifican según su migración electroforética, durante el curso de la cual se separan en varias fracciones distintas que, de menor a mayor movilidad, se denominan: quilomicrones, β - lipoproteínas/LDL, pre-β-lopoproteínas/VLDL, α-lipoproteínas/HDL y pre-α-lipoproteínas.

•  APARATAJE:

-Alimentador para electroforesis.
- Estufa.

• MATERIALES:

- Cubeta de electroforesis.
- Aplicador automático.
- Tiras de Cellogel.
- Láminas Mylar.
- Papel de filtro.
- Probeta.
- Pipeta Pasteur.

• REACTIVOS:

- Tampón (Tris-Hipurato).
- Colorante Negro Sudán A.
- Colorante Negro Sudán B.
- Suero.

• PROCEDIMIENTO:

1. PREPARACIÓN TAMPÓN-> 100 mL de  Tris-Hipurato en 1000 mL de agua destilada.
2. PREPARACIÓN DE LAS TIRAS DE CELLOGEL-> Introducir las tiras en tampón y agitar durante 10'.
3. PREPARACIÓN DE LA CUBETA DE ELECTROFORESIS -> llenar con tampón la cubeta de electroforesis de manera que en ambos compartimentos haya la misma cantidad.
4. PREPARACIÓN DE LA BANDEJA DE MUESTRA -> llenar con ayuda de una pipeta Pasteur la bandeja de muestras.
5. SECADO DE LAS TIRAS -> eliminar el exceso de tampón de las tiras entre dos hojas de papel de filtro.
6. COLOCACIÓN DE LAS TIRAS EN EL PUENTE Y APLICACIÓN DEL SUERO -> colocar las tiras de Cellogel en el puente con la superficie porosa hacia arriba. Colocar el puente en la cámara de electroforesis. Cargar el aplicador automático y aplicar en la tira con los dientes de éste fuera (repetir 3 veces).Tapar la cubeta de electroforesis y conectar la fuente de alimentación.
7. MIGRACIÓN -> 200V durante 35'.
8. TINCIÓN -> mezclar 50 mL de Negro Sudán A con 50 mL de Negro Sudán B. Sumergir la tira en la disolución de tinción durante aproximadamente 1 hora. Agitar en un agitador automático.
9. DECOLORACIÓN -> extraer la tira del baño de tinción y sumergir en agua destilada.

• LECTURA DE LOS RESULTADOS:

La lectura la hemos realizado con un programa informático(totallab).

• OBSERVACIONES:

Los resultados no corresponden con los obtenidos en nuestro proceso, porque hemos utilizado para la lectura otra tira de compañeros de cursos anteriores.

• FOTOGRAFÍAS: