PRÁCTICA 14: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE COLESTROL.

• UTILIDAD CLÍNICA:

El coleterol es una sutancia grasa presente en todas las células del organismo. El hígado produce naturalmente todo el colesterol que necesita para formar las membranas celulares y producir ciertas hormonas. La determinación del colesterol es una de las herramientas más importantes para el diagnóstico y clasificación de las lipemias. El aumento del nivel de colesterol es uno de los principales factores de riesgo cardiovascular.

• FUNDAMENTOS:

El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado según la siguiente racción:
                                            CHE
Éstres colesterol + H2O ----------------> Colsterol + Ácidos grasos.
                                 CHOD
Colsterol + 02 ----------------------> 4-Colesterol + H2O2
                                                                      POD
2H2O2 + Fenol + 4-Aminofenazona ----------------------> Quinonimina + 4H2O

La intensidad del color formado es proporciional a la concentración de colesterol presente en la muestra ensayada.

• APARATAJE:

- Espectofotómetro.

• MATERIALES:

-Tubos de ensayo.
- Gradilla.
- Micropipeta (1000µl y 10µl).
- Puntas de pipeta.
- Papel parafina.
- Gradilla de espectofotómetro.
- Cubetas de espectofotómetro.

• REACTIVOS:

R1
CHOLESTEROL CAL.
MUESTRA(SUERO).

• PROCEDIMIENTO:

-En primer lugar pipeteamos en los diferentes tubos de ensayo las cantidades siguientes:
    1. BLANCO -> 1000 µl R1.
    2. PATRÓN -> 1000 µl R1 y 10µl COLESTEROL CAL.
    3. MUESTRA ->  1000 µl R1 y 10µl COLESTEROL CAL.
 Seguidamente tapamos con parafina, mezclamos e incubamos 5" a 37ºC. - A continuación leemos la absorvancia del patrón y la muestra, frente a blanco de RT.Color estable como mínimo 30".

• RESULTADOS:

  Absorbancias: - Patrón= 0,355 nm. -Muestra= 0,285 nm. Cálculo: Abs. muestra/ Abs. patrón x 200(Conc. patrón)= mg /dL de colesterol en la muestra.
 0,285/0´355 X 200= 160'5 mg/dL de colesterol en la muestra. 

• FOTOGRAFÍAS: