PRÁCTICA 18: LDH.

• OBJETIVO:

Determinación cuantitativa de lactato deshidrogenasa(LDH).

• UTILIDAD CLÍNICA:

La LDH es una enzima, distribuida por todo el organismo humano. Las mayores concentraciones de LDH se encuentran en el hígado, corazón, riñón, músculo esquelético y eritrocitos.
El nivel de LDH en suero esta elevado en pacientes con enfermedades del hígado, infartos de miocardio,alteraciones renales, distrofias musculares y anemias.

• FUNDAMENTOS:

La lactato deshidrogenasa(LDH) cataliza la reducción del piruvato por el NADH, según la siguiente reacción:
Piruvato + NADH + H+ ----------------> L-lactato + NAD+
La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio determinado fotometricamente, es proporcional a la concentración catalítica de LDH en la muestra ensayada.

• APARATAJE:

- Espectofotómetro.
- Baño termostable.

• MATERIALES:

- Gradillas.
- Micropipeta 100μL.
- Puntas de pipeta.
- Cubeta de espectofotómetro.

• REACTIVOS:

- RT(1 comprimido de R2 en un vial de R1.
- Muestra(suero).

• PROCEDIMIENTO:

En primer lugar ajustamos el espectofotómetro con todos los datos que nos pide y prodecemos a medir:
- Ajustamos a cero frente a agua destilada.
- Añadimos 100μL de suero al RT, mezclamos bien y traspasamos a una cubeta de espectofotómetro a la que le calculamos las distintas absorbancias(4 MEDIDAS) trascurrido 1'.

• RESULTADOS:

- DATOS ESPECTOFOTÓMETRO DATA-TEST ATOM:

- 2,167 nm.
- 2,163 nm.
- 2,150 nm.
- 2,145 nm.
VELOCIDAD REACCIÓN -> 71,06 U/L LDH

-DATOS ESPECTOFOTÓMETRO BIOSYSTEM BTS-310:

- 1,870 nm.
- 1, 861 nm.
- 1,851 nm.
- 1,840 nm.
VELOCIDAD REACCIÓN -> 96,90 U/L LDH

CÁLCULO DE RESULTADOS:

- ESPECTOFOTÓMETRO DATA-TEST ATOM:

Intervalo I  -> 0,004
Intervalo II ->  0,013
Intervalo III -> 0,005
0,022/3 X 9690 = 71,06 UI/L

- ESPECTOFOTÓMETRO BIOSYSTEM BTS-310:


Intervalo I  -> 0,009
Intervalo II -> 0,01
Intervalo III -> 0,011
0,03/3 X 9690 = 96,90 UI/L

• FOTOGRAFIAS: