PRÁCTICA 19: UREA-B.

• OBJETIVO:

Determinación cuantitativa de urea en sangre

• UTILIDAD CLÍNICA:

La urea es el resultado final del metabolismo de las proteínas; se forma en el hígado a partir de su destrucción.
Puede aparecer la urea elevada en sangre(uremia) en dietas con exceso de proteínas, enfermedades renales, insuficiencias cardiacas, hemorragias gástricas, hipovolemiay obstrucciones renales.

• FUNDAMENTOS:

La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en NH4+ y C02.
Los iones amonio reaccionan con salicilato e ClONa, en presencia de catalizador nitroprusiato, para formar un indofenol verde.

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de urea en la muestra ensayada.

• APARATAJE:

- Espectofotómetro.
- Baño termostable.

• MATERIALES:

- Gradilla.
- Micropipeta 1000μL y 10μL.
- Puntas de pipeta.
- Cubeta de espectofotómetro.
- Gradilla de espectofotómetro.
- Tubos de ensayo.

• REACTIVOS:

- RT 1
- RT 2
- Calibrador.
- Muestra (Suero).

• PROCEDIMIENTO:

En primer lugar pipeteamos en diferentes tubos las siguientes cantidades:

- Blanco -> 1000μL RT.
- Patrón ->1000μL RT1 y 10μL patrón.
- Muestra VLG ->1000μL RT1 y 10μL muestra.
Mezclamos bien e incubamos 5' en el baño maría a 37ºC.
Pasado dicho tiempo, pipeteamos las siguientes cantidades:

- Blanco ->1000 μL RT2.
- Patrón ->  1000 μL RT2.
- Muestra -> 1000 μL RT2.
Mezclamos e incubamos 5' en el baño maría a 37ºC.

Seguidamente leemos la absorbancia del patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo.

RESULTADOS:

-MEDIDAS ESPECTOFOTÓMETRO.

- Blanco-> 0 nm.
- Patrón -> 0,249 nm.
- Muestra VLG -> 0,347 nm.

CÁLCULO:

(0,347 - 0)/(0,249 - 0) x 50 = 69,68 mg/dL de urea en la muestra.

• FOTOGRAFÍAS: