PRÁCTICA 20: CREATININA.

• OBJETIVOS:

Determinación cuantitativa de creatinina.

• UTILIDAD CLÍNICA:

La creatinina es el resultado de la degradación de la creatina, componente de los músculos y puede ser transformado en ATP, fuente de energía para las células.

La producción de creatinina depende de la modificación de la masa muscular. Varía poco y los niveles suelen ser muy estables. Se elimina a través del riñón. En una insuficiencia renal progresiva hay una retención en sangre de urea, creatinina y ácido úrico. Niveles altos de creatinina son indicativos de patología renal.

• FUNDAMENTOS:

El ensayo de la creatinina está basado en la reacción de la creatinina  con el picrato de sodio descrito por Jaffé.
La creatinina reaccióna con el picrato alcalino formando un complejo rojizo. El intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran parte de las interferencias conocidas del método.
La intensidad del color formado es proporcional a la [] de creatinina en la muestra ensayada.

• APARATAJE:

- Espectofotómetro.
- Baño termostatizado.

• MATERIALES:

- Gradilla.
- Micropipeta 1000μL y 100μL.
- Puntas de pipeta.
- Cubeta de espectofotómetro.
- Gradilla de espectofotómetro.
- Tubos de ensayo.

• REACTIVOS:

- R1
- R2
- Creatinine cal.
- Muestra(suero).

• PROCEDIMIENTO:

En primer lugar pipeteamos en diferentes tubos las siguientes cantidades:

- Blanco -> 1000μL RT.
- Patrón ->1000μL RT y 100μL patrón.
- Muestra VLG ->1000μL RT y 100μL muestra.
Ajustamos el espectofotómetro a cero frente a agua destilada.
Mezclamos y ponemos en marcha el cronómetro, realizando dos medidas, la primera a los 30'' y la segunda a los 60'' .

• RESULTADOS:

-MEDIDAS ESPECTOFOTÓMETRO:


- Blanco ->  0 nm   0 nm
- Patrón -> 0,014 nm   0,043 nm  -> ∆Absorbancia = 0,029 nm.
- Muestra VLG -> 0,126 nm   0,164 nm  ->   ∆Absorbancia = 0,038 nm.

CÁLCULOS:

(0,038 - 0/0,029 - 0)x 2 = 2,62 mg/dL de creatinina en la muestra.

• FOTOGRAFÍAS: