PRÁCTICA 22: FEHLING´S

• OBJETIVOS:

Detección de glucosa en orina.

MATERIALES:

- Tubos de vidrio.
- Micropipeta 1000 μL.
- Gradilla.
- Mechero de alcohol.
- Puntas de pipeta.

• REACTIVOS:

- Fehling´s A
- Fehling´s B

• MUESTRA:

- Orina.

• PROCEDIMIENTO:

Pipeteamos en el tubo de vidrio 3000μL de orina, 1000 μL de reactivo A y 1000 μL de reactivo B (homogeneizar bien).
Seguidamente pasaremos por la llama del mechero hasta que se produzca un cambio de viraje o no.

• RESULTADOS:

 - Vira a color rojo-ladrillo -> + . Presencia de glucosa en orina.
 - La muestra queda azul o cambia a un tono azul-verdoso -> - .Ausencia de glucosa en orina.

• FOTOGRAFÍAS:

PRÁCTICA 21: OBSERVACIÓN SEDIMENTOS URINAROS.

• OBJETIVOS:

Visualización de células en el sedimento urinario.

• UTILIDAD CLÍNICA:

Determinación de posibles enfremedades urinarias.

• APARATAJE:

- Centrífuga.
- Lector automático de tiras reactivas.
- Microscopio.

• MATERIALES:

- Tubos de centrífuga.
- Portaobjetos y cubreobjetos.
- Pipetas Pasteur.
- Orinas(muestra).

• PROCEDIMIENTO:

- En primer lugar centrifugar las diferentes orinas con la finalidad de obtener el sedimento de estas que posteriormente será visualizado al microscopio.
- Medirel pH con ayuda del lector automático de tiras reactivas.
- Decantar las orinas tras la centrifugación.
- Visualizar al microscopio.

• RESULTADOS:

MUESTRA 1:
- pH = 5
- Oxalato de calcio.
- Partículas de urato amorfo..
- Hematíes.
- Células de descamación.
- Células renales.

MUESTRA 2:
- pH = 6
- Tirosina.
- Bacteruiria.
- Células de descamación.

MUESTRA 3:

- Biurato de amonio.

MUESTRA 4:

- pH = 5
- Células de descamación.
- Células de transición.
- Leucocitos.

MUESTRA 5:

- pH = 5
- Células de descamación.
- Leucocitos.
- Bacteriurua.
- Hematíes.

MUESTRA 6:

- pH = 6
- Células de descamación.
- Partículas de urato amorfo.

MUESTRA 7:

- pH = 6'5
- Leucocitos (leucocituria).
- Fibra vegetal.

MUESTRA 8:

- pH = 7
- Bacilos.
- Células de descamación.
- Cocos.
- Hematíes.

MUESTRA 9:

- pH = 6
- Células de descamación.
- Mucina.

MUESTRA 10:

- pH = 5
- Hematíes.

MUESTRA 11:

- Ph = 5
- Sulfato de calcio.

MUESTRA  12:

- pH = 6
- Bacterias.
- Bacilos.
- Leucocitos.
- Cristales de fosfato triple.

 

ALMIDÓN.

 

BILIRRUBINA

 

BIURATO DE AMONIO

 

CILINDRO GRANULOSO.

 

CILINDRO HIALINO.

 

CILINDRO LEUCOCITARIO.

 

CRISTAL FOSFATO TRIPLE.

 

CRISTALES DE OXALATO.

 

CÉLULA RENAL, CÉLULA DE TRANSICIÓN Y CRISTALES DE FOSFATO.

 

CÉLULAS ESCAMOSAS.

 

FIBRAS VEGETALES.

 

FOSFATO.

 

LEUCOCITURIA.

 

LEVADURA(CÁNDIDA).

 

MUCINA.

 

OXALATO TRIPLE.

 

TIROSINA.

 

TRICOMONA.

 

URATO DE SODIO.

• FOTOGRAFÍAS:

• OBSERVACIONES:

Para la visualización de orina es necesario que el condensador esté bajado y el diafragma semicerrado.

PRÁCTICA 20: CREATININA.

• OBJETIVOS:

Determinación cuantitativa de creatinina.

• UTILIDAD CLÍNICA:

La creatinina es el resultado de la degradación de la creatina, componente de los músculos y puede ser transformado en ATP, fuente de energía para las células.

La producción de creatinina depende de la modificación de la masa muscular. Varía poco y los niveles suelen ser muy estables. Se elimina a través del riñón. En una insuficiencia renal progresiva hay una retención en sangre de urea, creatinina y ácido úrico. Niveles altos de creatinina son indicativos de patología renal.

• FUNDAMENTOS:

El ensayo de la creatinina está basado en la reacción de la creatinina  con el picrato de sodio descrito por Jaffé.
La creatinina reaccióna con el picrato alcalino formando un complejo rojizo. El intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran parte de las interferencias conocidas del método.
La intensidad del color formado es proporcional a la [] de creatinina en la muestra ensayada.

• APARATAJE:

- Espectofotómetro.
- Baño termostatizado.

• MATERIALES:

- Gradilla.
- Micropipeta 1000μL y 100μL.
- Puntas de pipeta.
- Cubeta de espectofotómetro.
- Gradilla de espectofotómetro.
- Tubos de ensayo.

• REACTIVOS:

- R1
- R2
- Creatinine cal.
- Muestra(suero).

• PROCEDIMIENTO:

En primer lugar pipeteamos en diferentes tubos las siguientes cantidades:

- Blanco -> 1000μL RT.
- Patrón ->1000μL RT y 100μL patrón.
- Muestra VLG ->1000μL RT y 100μL muestra.
Ajustamos el espectofotómetro a cero frente a agua destilada.
Mezclamos y ponemos en marcha el cronómetro, realizando dos medidas, la primera a los 30'' y la segunda a los 60'' .

• RESULTADOS:

-MEDIDAS ESPECTOFOTÓMETRO:


- Blanco ->  0 nm   0 nm
- Patrón -> 0,014 nm   0,043 nm  -> ∆Absorbancia = 0,029 nm.
- Muestra VLG -> 0,126 nm   0,164 nm  ->   ∆Absorbancia = 0,038 nm.

CÁLCULOS:

(0,038 - 0/0,029 - 0)x 2 = 2,62 mg/dL de creatinina en la muestra.

• FOTOGRAFÍAS:

 

 

 

PRÁCTICA 19: UREA-B.

• OBJETIVO:

Determinación cuantitativa de urea en sangre

• UTILIDAD CLÍNICA:

La urea es el resultado final del metabolismo de las proteínas; se forma en el hígado a partir de su destrucción.
Puede aparecer la urea elevada en sangre(uremia) en dietas con exceso de proteínas, enfermedades renales, insuficiencias cardiacas, hemorragias gástricas, hipovolemiay obstrucciones renales.

• FUNDAMENTOS:

La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en NH4+ y C02.
Los iones amonio reaccionan con salicilato e ClONa, en presencia de catalizador nitroprusiato, para formar un indofenol verde.

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de urea en la muestra ensayada.

• APARATAJE:

- Espectofotómetro.
- Baño termostable.

• MATERIALES:

- Gradilla.
- Micropipeta 1000μL y 10μL.
- Puntas de pipeta.
- Cubeta de espectofotómetro.
- Gradilla de espectofotómetro.
- Tubos de ensayo.

• REACTIVOS:

- RT 1
- RT 2
- Calibrador.
- Muestra (Suero).

• PROCEDIMIENTO:

En primer lugar pipeteamos en diferentes tubos las siguientes cantidades:

- Blanco -> 1000μL RT.
- Patrón ->1000μL RT1 y 10μL patrón.
- Muestra VLG ->1000μL RT1 y 10μL muestra.
Mezclamos bien e incubamos 5' en el baño maría a 37ºC.
Pasado dicho tiempo, pipeteamos las siguientes cantidades:

- Blanco ->1000 μL RT2.
- Patrón ->  1000 μL RT2.
- Muestra -> 1000 μL RT2.
Mezclamos e incubamos 5' en el baño maría a 37ºC.

Seguidamente leemos la absorbancia del patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo.

RESULTADOS:

-MEDIDAS ESPECTOFOTÓMETRO.

- Blanco-> 0 nm.
- Patrón -> 0,249 nm.
- Muestra VLG -> 0,347 nm.

CÁLCULO:

(0,347 - 0)/(0,249 - 0) x 50 = 69,68 mg/dL de urea en la muestra.

• FOTOGRAFÍAS: