PRÁCTICA 29: SEMINOGRAMA.

• OBJETIVO:

Valorar la capacidad reproductora de un varón. También cuando se realice un estudio postvasectomía, con la intención de comprobar si los espermatozoides han desaparecido totalmente del eyaculado.

• APARATAJE:

- Baño termostatizado.
- Estufa.

• MATERIALES:

- Portaobjetos y cubreobjetos.
- Pipeta Pasteur.
- Cámara de Neubauer.
- Microscópio.

• REACTIVOS:

- Eosina azulada 1% con agua destilada.
- Nigrosina 2% con agua destilada.
- Solución de Macomber-Saunders ( 5g bicarbonato sódico, 1ml formol al 40% y agua dstilada hasta 100 mL).
- Panóptico rápido.
- Metanol.

• MUESTRA:

Semen.

• PROCEDIMIENTO:

EXÁMEN MICROSCÓPICO :

- VITALIDAD:
Mezclar 50µl de semen con 50µl de eosina axulada , esperar 20/30'' y añadir 100µl de nigrosina.
Agitar y realizar una extensión sobre portaobjetos.
Tras el secado de la preparación, observar al microscopio con objetivo de inmersión.

- RECUENTO:
Diluimos el semen al 1/10 en la solución de Macombe-Sanders
Montamos y cargamos la cámara de Neubauer y contamos los 16 cuadraditos de las esquinas (zona para leucocitos).

- MORFOLOGÍA:
 Realizamos una extensión sobre portaobjetos con una gota de semen y dejaos que seque perfectamente en estufa. 
 Fijar con metanol(5', renovando cada 1'5 minutos).
Teñir con panóptico rápido.
Visualizar al microscopio con el objetivo de inmersión:

• FOTOGRAFÍAS Y RESULTADOS:

-VITALIDAD:

Todos los espermatozoides están teñidos de rojo (muertos).

- RECUENTO:

Espermatozoides contados -> 82
82x10x10000 = 8200000 espermatozoides/ml

- MORFOLOGÍA:

Espermatozoides normales -> 8
Espermatozoides anormales ->  17

PRÁCTICA 28: INMUNODOTING PARA HEPATITIS AUTOINMUNES

• OBETIVOS:

Detección en suero humano de auto-Ac tipo Ig G-Ig M antimicondriales M2 dirigidos contra los siguientes Ag: M2/PDC nativo y M2 recombinante.

• FUNDAMENTOS:

La prueba se basa en el principio de Enzimoinmunoanális.

• APARATAJE:

- Agitador automático.

• MATERIALES Y REACTIVOS:

- Tira dot.
- Bandeja de incubación.
- Tampón de dilución: tapón amarillo.
- Conjugado: tapón azul.
- Sustrato: bote marrón.
- Pipetas automáticas.
- Vaso de precipitado.
- Muestra (suero).

• PROCEDIMIENTO:

- Colocar la tira dot en el canal de la bandeja de incubación con los puntos azules mirando hacia arriba.
- Añadir 2000 μL de tampón de lavado en dicho canal. Incubar 10' en agitación (hasta hacer desaparecer los puntos azules de la tira).
- Invertir la bandeja y eliminar el líquido (las tiras quedarán adheridas)
- Añadir 1500μL de tampón de dilución .
- Añadir 1000μL de muestra del paciente. Incubar 15' en agitación.
- Eliminar el líquido invirtiendo la bandeja. Lavar tres veces con 1500μL de tampón de lavado.
- Añadir 1500μL de conjugado. Incubar 15' en agitación.
- Eliminar el líquido invirtiendo la bandeja. Lavar tres veces con 1500μL de tampón de lavado.
- Añadir 1500μL de sustrat. Incubar 10' en agitación.
- Eliminar el líquido invirtiendo la bandeja. Lavar una vez más con 1500μL de tampón de lavado para obtener la reacción.
- Extraer la tira del canal y dejar secar en papel absorbente para visualizar resultados.

• RESULTADOS:

- Control positivo -> + . Debe aparecer coloreado en todos los pacientes, esto indicará que la prueba se ha desarrollado correctamente.
- Control negativo -> - . Indica que la muestra está libre de sustancias que interfieran.
- El resto de puntos correspondientes a antígenos específicos  aparecen como -.

• FOTOGRAFÍAS:

PRÁCTICA 27: GOT (AST)

• OBETIVOS:

Determinación cuantitativa de asparrtato aminotransferasa GOT (AST).

• UTILIDAD CLÍNICA:

Se emplea para diagnóstico de enfermedad hepática, junto con otras enzimas como la ALT y la ALP. También se utiliza en el control post-infarto, en pacientes con desordenes del músculo esquelético, y en otras afecciones.

• FUNDAMENTOS:

La AST, cataliza la tranferencia reversible de un grupo amino del aspartato al  α-cetoglutarato con formación de glutamato y oxalacetato. El oxalacetato producido es reducido a malato en presencia de malato deshidrogenasa y NADH.

• APARATAJE:

- Espectofotómetro.

• MATERIALES:

- Gradillas.
- Micropipeta 1000 Y 100μL.
- Puntas de pipeta.
- Cubeta de espectofotómetro.

• REACTIVOS:

- RT.
- Muestra.

• PROCEDIMIENTO:

Añadimos 1000 μL de RT
Ajustamos el espectofotómetro con todos los datos que nos pide y prodecemos a medir:
- Ajustamos a cero frente a aire.
- Añadimos 100μL de suero al RT, mezclamos bien y traspasamos a una cubeta de espectofotómetro a la que le calculamos las distintas absorbancias(4 MEDIDAS) trascurrido 1'.

• RESULTADOS:

- DATOS ESPECTOFOTÓMETRO DATA-TEST ATOM:

-  1,671 nm.
-  1,674 nm.
-  1,669 nm.
- 1'657 nm.
VELOCIDAD REACCIÓN -> 11,66 U/L de AST

• OBSERVACIONES:

El espectofotómetro utilizado está dando fallo, porque las absorbancias deben ser decrecientes y la primera y la segunda no lo son.

• FOTOGRAFÍAS: 

PRÁCTICA 26: BILIRRUBINA TOTAL.

• OBJJETIVO:

Determinación de bilirrubina total en suero.

• UTILIDAD CLÍNICA:

 La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina. Es transportada del bazo al hígado y se excreta en bilis.
La hiperbilirrubinemia es el resultado de un crimento de la bilirrubina en plasma. Causas más probables de la hiperbilirrubinemia.
Bilirrubina total-> aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia neonatal, alteraciones eritropoyéticas, presencia de drogas.

• FUNDAMENTOS:

 La bilirrrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanilico diazotado midiéndose fotométricamente.  En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina también la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total.

• APARATAJE:

- Espectofotómetro.

• MATERIALES:

 - Pipetas de 1500μl, 100 μl y 50μl.
- Puntas de pipeta.
- Gradilla.
- Cubetas de espectofotómetro.
- Gradilla de espectofotómetro.

• REACTIVOS:

- R1
- R2
- Muestra(suero).

•  PROCEDIMIENTO:

En primer lugar pipetearemos las siguientes cantidades:
- Blanco -> 1500μl, R1 y 100μl muestra.
- B. Directa -> 1500μl R1, 50μl R2 y 100μl muestra.
Mezclar e incubar 5' a 15/25ºC.
Leer absorbancias.

• RESULTADOS:

 ABSORBANCIAS:
- Blanco = 0 nm
- Bilirrubina Total= 0,105 nm


 ((A) MUESTRA - (A) BLANCO MUESTRA) X 22=  mg/dL bilirrubina en la muestra.

(0´105 - 0) x 22 = 2'3 mg/dL bilirrubinae en muestra. 
  

• FOTOGRAFÍAS: