PRÁCTICA 28: INMUNODOTING PARA HEPATITIS AUTOINMUNES

• OBETIVOS:

Detección en suero humano de auto-Ac tipo Ig G-Ig M antimicondriales M2 dirigidos contra los siguientes Ag: M2/PDC nativo y M2 recombinante.

• FUNDAMENTOS:

La prueba se basa en el principio de Enzimoinmunoanális.

• APARATAJE:

- Agitador automático.

• MATERIALES Y REACTIVOS:

- Tira dot.
- Bandeja de incubación.
- Tampón de dilución: tapón amarillo.
- Conjugado: tapón azul.
- Sustrato: bote marrón.
- Pipetas automáticas.
- Vaso de precipitado.
- Muestra (suero).

• PROCEDIMIENTO:

- Colocar la tira dot en el canal de la bandeja de incubación con los puntos azules mirando hacia arriba.
- Añadir 2000 μL de tampón de lavado en dicho canal. Incubar 10' en agitación (hasta hacer desaparecer los puntos azules de la tira).
- Invertir la bandeja y eliminar el líquido (las tiras quedarán adheridas)
- Añadir 1500μL de tampón de dilución .
- Añadir 1000μL de muestra del paciente. Incubar 15' en agitación.
- Eliminar el líquido invirtiendo la bandeja. Lavar tres veces con 1500μL de tampón de lavado.
- Añadir 1500μL de conjugado. Incubar 15' en agitación.
- Eliminar el líquido invirtiendo la bandeja. Lavar tres veces con 1500μL de tampón de lavado.
- Añadir 1500μL de sustrat. Incubar 10' en agitación.
- Eliminar el líquido invirtiendo la bandeja. Lavar una vez más con 1500μL de tampón de lavado para obtener la reacción.
- Extraer la tira del canal y dejar secar en papel absorbente para visualizar resultados.

• RESULTADOS:

- Control positivo -> + . Debe aparecer coloreado en todos los pacientes, esto indicará que la prueba se ha desarrollado correctamente.
- Control negativo -> - . Indica que la muestra está libre de sustancias que interfieran.
- El resto de puntos correspondientes a antígenos específicos  aparecen como -.

• FOTOGRAFÍAS: