PRÁCTICA 3: GLUCOSA HEXOQUINASA.

• OBJETIVOS: 

Determinación cuantitativa de glucosa.

• UTILIDAD CLÍNICA:

   La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo; la insulina facilita la entrada de glucosa en las células.La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucémia(déficit de insulina).

FUNDAMENTOS:
La HK(hexokinasa) cataliza la fosforilación de la glucosa por ATP a G6F(glucosaa-6-fosfato). La G6F originada es reducida a 6-fosfogluconato en presencia de G6F-DH(glucosa-6-fosfato deshidrogenasa) con reducción paralela de NAD a NADH.
El aumento en la [ ] de NADH en el medio es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra ensayada.

• APARATAJE:

Espectofotómetro.
Utilidad:
Instrumento utilizado para las medidas de absorción de REM(radiación electromagnética).

• MATERIALES:

- Gradilla.
- Tubos de ensayo(3).
- Micropipetas(10µl y 1000µl).
- Puntas de pipeta.
- Gradilla de espectofotómetro.
- Cubetas de espectofotómetro. 
- Parafina.

• REACTIVOS:

- RT.
- Patrón.
- Muestra(suero). 

• PROCEDIMIENTO: 

- En primer lugar pipeteamos en los diferentes tubos de ensayo las cantidades siguientes:

1.  BLANCO ->  1000 µl de RT
2. PATRÓN -> 1000 µl de RT y 10 µl patrón
3.  MUESTRA -> 1000 µl de RT y 10 µl de muestra(suero).

- Seguidamente tapamos con parafina, mezclamos e incubamos 5" a 37ºC.
- A continuación leemos la absorvancia del patrón y la muestra, frente a blanco de RT.
Importante dejar 2-3" de diferencia entre medida y medida.

• RESULTADOS:

 
Absorbancias:
- Patrón= 0,314 nm.
-Muestra= 0,376 nm.
Cálculo:
(Abs. muestra - Abs. blanco/Abs. patrón - Abs. blanco) x 100(Concentración Patrón)= mg/dL de glucosa en la muestra 
((0,376-0)/(0,314-0))x100= 119,75 mg/dL de glucosa en la muestra

• FOTOGRAFÍAS: