PRÁCTICA 5: CUANTIFICACIÓN DE PROTEINAS EN ORINA CON ÁCIDO SULFOSALICÍDICO POR TURBIDIMETRÍA

• OBJETIVO:

Cuantificar la [ ] de proteinas presentes en orina mediante método turbidimétrico.

• FUNDAMENTO:

La adición de ácido sulfosalicídico a una solución de proteínas actúa sobre estas, dando lugar a la aparición de un fino precipitado en suspensión. Este precipitado se observa como una turbidez blanquezina cuya intensidad puede ser cuantificada por turbidimetría.

• APARATAJE:

Fotómetro. Utilidad:
Instrumento utilizado para las medidas de absorción de REM(radiación electromagnética).

• MATERIALES:

- Tubos de ensayo (7 tamaño normal y 4 con capacidad para más de 10 mL).
- Pipetas automáticas ( 200µl , 100µl, 50µl y 25µl).
- Cubetas de fotómetro.
- Gradillas de fotómetro.
- Papel parafina.

• REACTIVOS:

- Suero salino fisiológico(0'9 g/dL).
- Ácido sulfosalicídico al 3%(p/v) en agua destilada.
- Patrón de proteínas(7 g/dL).
- Albúmina bovina.
-Orina(24h).

• PROCEDIMIENTO:

- En primer lugar prepararemos una batería de disolución en los tubos de mayor tamaño:
 D1-> 1/50 (0,2 mL patrón + 9,8 ml de SSF)-> 140 mg/dL.
 D2-> 1/100 (0,1 mL patrón + 9,9 ml de SSF) -> 70 mg/dL.
 D3-> 1/200 (0,05 mL de patrón + 9,95 ml de SSF) -> 35 mg/dL.
 D4-> 1/400 (0,025 ml patrón + 9,975 ml de SSF) -> 17,5 mg/dL.

Y el ácido sulfosalicídico al 3%:
3 g de ácido sulfosalicído + 100 mL de agua destilada.

-A continuación prepararemos  7 tubos con las siguientes cantidades:
BR -> 0,5 mL SSF + 2,0 mL ácido sulfosalicídico.
P1 -> 0´5 D1 + 2,0 mL ácido sulfosalicídico.
P2 -> 0,5 D2 + 2,0 mL ácido sulfosalicídico.
P3 -> 0,5 D3 + 2,0 mL ácido sulfosalicídico.
P4 -> 0,5 D3 + 2,0 mL ácido sulfosalicídico.
BM -> 2,0 mL SSF + 0,5 orina.
Segidamente tapamos los tubos y agitamos por inversión, transferimos su contenido   a las cubetas , seleccionamos la longitud de onda a 600 nmy procedemos a realizar las medidas de la siguiente forma:

- Ajusta a cero el fotómetroo con el BR.
-Medir la absorbancia de P1,P2,P3 y P4.
-Ajusta a cero el fotómetro con el BM.
- Medir la absorbancia del PB.

• RESULTADOS :

Absorbancias:              Concentraciones:
-BR-> 0 nm
- P1-> 1,305 nm.           28 mg/dL.
- P2-> 0,586 nm.           14 mg/dL.
- P3-> 0,212 nm.           7 mg/dL.
- P4-> 0,154 nm.           3,5 mg/dL.
- BM -> 0 nm.
- PB-> 0,637 nm

• FOTOGRAFÍAS: