PRÁCTICA 6: PROTEÍNAS TOTALES. REFRACTOMETRÍA Y MÉTODO DE BIURET.


MÉTODO DE BIURET :

• OBJETIVOS:

Determinación cuantitativa de proteínas totales. 

• UTILIDAD CLÍNICA:

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo. Actúan como elementos estructurales y de transporte . Se dividen en dos fracciones, albúmina y globulinas.
Su determinación es útil para la detección de:
- Hiperproteinemia producida por hemoconcentración, deshidratación o aumento en la concentración de proteínas específicas.
-  Hipoproteinemia por hemodilución debida a un defecto en la síntesis proteica, pérdidas excesivas (hemorragias) o catabolismo proteico excesivo.

• FUNDAMENTOS:

En medio alcalino, las proteínas dan un intenso color violeta azulado en presencia de sales de cobre: contiene yoduro como antioxidante .
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de proteína total en la muestra ensayada.

• APARATAJE:

Espectofotómetro.
Utilidad:
Instrumento utilizado para las medidas de absorción de REM(radiación electromagnética).

• MATERIALES:

- Micropipetas (25µl y 1000µl).
- Puntas de micropipeta.
- Tubos de ensayo(3)
- Gradilla.

• REACTIVOS:

- R
- Patrón.
- Muestra(suero).

• PROCEDIMIENTO:

 -En primer lugar pipeteamos en los diferentes tubos de ensayo las cantidades siguientes:

1.  BLANCO ->  1000 µl de R
2. PATRÓN -> 1000 µl de R y 25 µl patrón
3.  MUESTRA -> 1000 µl de R y 25 µl de muestra(suero).

- Seguidamente tapamos con parafina, mezclamos e incubamos 5" a 37ºC. - A continuación leemos la absorvancia del patrón y la muestra, frente a blanco de RT.Color estable como mínimo 30".

• RESULTADOS:

 Absorbancias: - Patrón= 0,548 nm. -Muestra= 0,419 nm. Cálculo: Abs. muestra/ Abs. patrón x 7(Conc. patrón)= mg /dL de glucosa en la muestra.
 0,419/0,584 x 7= 5,022 g/dL de proteínas totales.

• FOTOGRAFÍAS:

 REFRACTOMETRÍA:

Para la realización de esta práctica necesitaremos un refractómetro (aparato que se utiliza para medir la concentración de distintas disoluciones basandose en su índice de refracción).

• PROCEDIMIENTO:

- En primer lugar calibraremos el aparato con H20.
- Seguidamente limpiamos y añadimos una gota del suero a medir 
- Finalmente limpiamos .

• FOTOGRAFÍAS:

 RESULTADOS:

-Densidad suero= 6,1 g/dLde proteínas.